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    鸡传染性支气管炎(症状图谱)

    日期:2013-06-18    点击:3070    查看原图    全部展开
    【鸡传染性支气管炎】病鸡排出卵黄,卵清样的物质









     
    图库说明
    概  述 
        鸡传染性支气管炎(Infectious Bronchitis of Chickens, IB)是有世界性分布的、由病毒引起的一种仅发生于鸡的急性、高度接触性的呼吸道疾病。各个鸡龄均易感,幼鸡以喘气为突出症状,在产蛋鸡出现蛋产量和品质下降。如果病原不是肾病变型毒株或不发生并发病,死亡率一般很低。该病病原的血清型较多,新的血清型不断出现,加上不适当的免疫程序,常导致免疫失败,致使该病不能得到有效控制,给养鸡业造成巨大损失。
     
    病  原 
        鸡传染性支气管炎病毒(IBV)是冠状病毒科的代表种,为一种带囊膜单股RNA的病毒,其核酸呈螺旋对称性。电镜观察,病毒粒子略呈球形,直径80~120nm,有囊膜,囊膜上有12~24nm长的、末端呈圆形的梨状纤突,纤突间的间隙较宽,形成规则排列,宛如皇冠状,故名冠状病毒。直接从鸡体分离的病毒,纤突较齐全,而在体外传代的毒株往往部分缺失。
        IBV核酸有27 000多碱基对长,为不分节RNA病毒中基因组最长者。李德山等(1991)对本病毒的结构蛋白进行分析后发现共有4种,其中分子量为90K的是纤突蛋白(S),合成后分裂成的S1,84K为纤突蛋白分裂成的S2,51K为核衣壳蛋白(N),30K为整合在双层膜中的膜蛋白(M)。S1与中和抗体和血凝抑制(HI)抗体有关,S2与吸附有关。
        对各地分离的IBV野毒进行理化特性测定,各实验室使用的条件和得出的结论不尽相同。上海地区的沪1株于56℃,15~30min仍有感染致死鸡胚的活性;北京地区分离的G22株30min已基本灭活,而s株可耐受45min。据认为,耐热株作制苗用有价值。IBV毒种保存宜于低温进行,-20~-30℃可存活7年,冻干置于3~4℃,19年仍存活。
        鸡胚是繁殖IBV最常用的实验室宿主系统。一般将病料接种9~11日龄鸡胚的尿囊腔作初次分离。第一次接种往往不引起鸡胚死亡,但随着传代次数的增加,IBV对鸡胚的致病力也将增强。这表现为鸡胚死亡率增加,死亡时间提早,胚体发育受阻而出现蜷缩胚或侏儒胚。不管哪一代次早期死亡的胚体可见充血、出血,后期死亡或存活的胚体则无此变化。可在第二代出现死胚。出现蜷缩胚或侏儒胚的代次视分离株可发生在第2~7代,而达到80%蜷缩胚则代次要更多,有7~22代不等。
        蜷曲胚:鸡胚的脚抱住头部,活动缓慢或不能自由活动;打开蛋壳后可见羊膜增厚,表面显得干燥、纤维化,并显得混浊不太透明,紧紧包裹着胚,羊水量也比正常胚少,甚至没有羊水,羽毛发育不良,故也称“僵化胚”。
        侏儒胚:外形似乎正常,但比同龄正常胚小1/3至1/2,接种后6天尤为明显,鸡胚泄殖腔肿胀并常见内有白色脂肪样小滴的囊状物,肺部有浆液性渗出液,并比正常胚的肺小。肝呈紫色或边缘有杏黄色的胆性病变,有的甚至有局部坏死或整个肝变成绿色。再有一个明显的特点是许多胚尿囊液清澈透明,其尿囊液的量也有所增加。
        应用鸡胚肾(CEK)细胞繁殖  病毒引起合胞体形成,合胞体最终脱落和死亡而使细胞单层出现空斑。未完全或完全脱落的合胞体,由于表面张力的关系呈球形,外缘整齐,内有占大部分的透明空泡。这种细胞病变在初次分离野毒时一般是见不到的,往往需要连续传代6次以上才出现。CEK原代细胞培养物除了有对IBV易感的类上皮型细胞外,其实还存在不易感的成纤维细胞。待后者逐步增多而占据原先的空斑,就可能出现后来细胞病变反而变少的现象。这是观察IBV感染的原代细胞培养物时要注意的。
        只有少数IBV株才可生长在非鸡源的Vero细胞上,用胰酶(6µg/m1)处理Vero细胞,可以使感染IBV的细胞培养物的细胞融合率大大提高,如5%~100%。
        鸡气管上皮细胞对IBV易感性很高。细胞被感染后,其突入腔内的纤毛逐渐停止原来极迅速的摆动。刘福安(1983,1989)利用鸡胚气管器官培养物来确定在CEK细胞上育传IBV过程中是否仍存在病毒以及筛选IBV免疫原单克隆抗体。感染后的上皮细胞其纤毛运动于24h明显减慢,72h则完全停止并伴有细胞脱落。此法虽然简单但要求制备气管环时预先剥净外面的脂肪和使用倒置显微镜观察。
        IBV不凝集鸡红细胞,能够干扰新城疫病毒B1株在鸡胚里的繁殖。这些特性可利用于提纯、鉴定新分离的IBV。
        IBV是一种较容易发生变异的病毒。可根据病毒-血清中和试验将毒株分类为若干血清型,也可视其致病程度分类为若干病理型。至少有14个血清型。马萨诸塞(M)型引起最严重的呼吸系症状,是我国的主要流行株,可与康涅狄格(Conn)型交叉免疫。荷兰(H)株对M、Conn、JMK、佛罗里达和SE-17株可产生交叉免疫,故在我国是主要的疫苗毒株。IBV有4个病理型。Ⅰ型:不引起呼吸道症状,但引起喉和气管组织学病变。Ⅱ型:引起明显呼吸道症状以及上呼吸道组织学病变。Ⅲ型:引起明显呼吸道症状以及上呼吸道和支气管组织学病变。Ⅳ型:引起所有上述呼吸道症状与病变以及间质性肾炎。与M株具有相同抗原簇的毒株,属于Ⅲ型,其他与荷兰变异株有相同抗原簇的属于Ⅳ型。

     
    流行病学 
        自从1930年在美国Dakota州发现鸡传染性支气管炎并于次年报道后,世界各国陆续有报道。据齐新勇(1991)撰文,我国50年代就有本病的报道。但比较确实是70年代后期80年代早期的、既有临诊观察又分离到病原的报道。1978年从杭州爆发一次疫情的病鸡分离到一株IBV(郑福荣等,1980);上海市松江县1978年一次爆发分离到一株IBV,定名为沪1株(吴志达等,1981);广州(辛朝安,1982),北京,广西(艾国光等,1982),新疆(胡仁山等,1984)也陆续报道分离到IBV。根据临诊观察或血清学资料诊断IB的尚有其他地区,如山东(艾矗等,1984;李广兴,1985),黑龙江(耿忠堂,1984),陕西(冠玫霞等,1991)。
        肾病变型IB是引起感染鸡死亡率最高的病理型。病原是少数IBV血清型。如澳大利亚T株、Holte和Gray株以及M型的一些株。此种以肾脏损害为特征的鸡传染病1848年就在澳大利亚发现,但只有到了1962年才由Cumming成功地分离病原并鉴定为一种 IBV。此病后被人称Cumming氏病。国内首先发现此型IB是在广东省惠阳市多年来一直进VI澳大利亚狄高鸡苗某合资鸡场,随后分离到IBV并复制了该病(刘镇明等,1983;林绍仪,1983)。其他省份陆续也有此型IB的报道,如广西(冯加明,1984),北京(范国雄等,1988)。北京的分离物经中国兽药监察所鉴定为IBV—T株。
        自然易感的家禽只有鸡,艾国光等(1982)报道,品种间无差异,后来邝荣禄等(1982)发现在IB肾变病型有品种差异,以来航鸡最易感。无年龄易感性,只要没有免疫力,任何鸡龄均可感染IB,但主要发生在7~35日龄的幼鸡群且症状较为明显,死亡率可达15%~19%。
        传染方式主要是气源性。虽然IBV对外界因素抵抗力不强,但其传染性极高,据认为一个病毒粒子可以引起感染,故在集约化鸡群中1~2天内很快波及全群。致于IB是否属胚传递性疾病,目前似乎未有确实结论。据国外资料,从感染母鸡产下的蛋可分离到 IBV,但感染母鸡产下的蛋所孵出的小鸡却无本病病毒(《禽病学》高福等译,1991)。可是,从接种野毒的第一代鸡胚一般不死亡的现象说明存在这种可能性。

     
    临床症状 
        根据国外资料,人工感染IB潜伏期很短,一般为18~36h。国内报道,有的为24h(吴志达等,1981),有的则较长,从48~72h(艾国光等,1982)到3~7天(郑福荣等,1980)。
        一般无前驱症状,突然出现呼吸困难并迅速全群发病。常表现伸颈,张口呼吸,喷嚏,咳嗽,甩头,呼吸时有“咕噜、咕噜’’的特殊叫声(罗音),特别是在夜间寂静时更听得清楚。个别严重的甚至出现犬坐姿势。鼻窦肿胀,流粘液性鼻液,眼泪多。病情发展下去,病鸡全身衰弱,羽毛松乱,昏睡,双翼下垂,常挤在一起(艾矗等,1984)。如果没有其他并发病,一般病程为3~14天,亦有超过14天者,死亡率约为5%(郑福荣等,1980)。日龄越小死亡率越高。中、大雏死亡很少。幼雏期感染IB,有相当多的雌雏输卵管发育受阻,造成生殖器官永久性的功能障碍,成为表面上正常但不下蛋的“假产蛋者”。这种母鸡与真正产蛋的鸡比较,往往唯有泄殖腔较窄、缺乏柔润弹性。对一批15日龄时发生过、经确诊为IB以及一些未发病的商品蛋鸡跟踪观察发现:两批育成率(83.1%、83.6%)和开产日龄(177、174)差不多,但高峰产蛋率(70.8%、81.34%)相差很大且发病群淘汰率为健康群的8倍(朱瑞琪等,1985)。产蛋期成年鸡感染IB一般无明显呼吸道症状,但免疫力很低时也能出现精神萎靡、食欲废绝、羽毛松乱、双翼下垂,以及咳嗽、张口喘气、罗音等呼吸道症状(李广兴,1985),但不管其他症状如何,必定有产蛋率骤降和出现软壳蛋等现象。这符合母鸡产蛋功能是最为敏感的生理功能的概念。

     
    病理变化 
        肉眼可见结膜炎,鼻腔、鼻窦、咽喉、气管内粘液增量,呈半透明粘稠样,病程稍长变为干酪样。在支气管及肺支气管可见肺炎灶和水肿,气囊混浊程度不一,可见条、点状干酪样物附着,肝脏稍肿大、呈土黄色。
        肾病变型IB除呼吸器官病变外,可见肾肿大、苍白,外观似油灰样,小叶清楚,肾小管由于尿酸及尿酸盐充塞而扩张。个别病例腹膜、心包膜乃至整个脏器上,也有白色尿酸盐沉积(见彩色图版图27)。有些可见法氏囊有炎症和出血症状。
        15日龄感染过IB的、失去产蛋能力的成年母鸡,剖检时见输卵管呈稚型或萎缩,总长平均为15~18cm,而同龄正常鸡的为30~60cm。
        组织学变化:气管粘膜上皮脱落坏死,固有膜层增厚、充血、水肿,有淋巴样细胞和嗜酸性粒细胞浸润。肺小叶结构不清楚。支气管内有嗜酸性粒细胞、淋巴样细胞和脱落上皮细胞。部分支气管周围淋巴样细胞增生,管腔狭窄。动脉周围结缔组织增生,腔内有多量红细胞。病变区肺泡消失,为细胞增生所代替,增生的细胞有嗜酸性粒细胞、淋巴样细胞、中性粒细胞。部分支气管腔内有嗜伊红均质渗出液。心肌纤维疏松、水肿,有淋巴样细胞浸润。肝门静脉充满红细胞,小叶间细胞浸润、淋巴细胞渗出,少数肝细胞水肿变性。肾病变型病例以肾的变化为特征。肾小管上皮颗粒变性,集尿管和部分肾小管腔扩张,上皮变扁或呈空泡状,管腔中充积已破碎的异嗜性白细胞以及多量的淋巴细胞、浆细胞。部分病例血管内形成血栓。病变以小叶区最明显。发生内脏型痛风的病例,除上述变化外,尚见集尿管中有痛风石形成,管腔中央为红染结晶,周围多核巨细胞和淋巴细胞,有的病例肾小管上皮细胞坏死钙化。

     
    诊断鉴别 
        根据流行病学、临诊症状、剖检以及应用多种抗菌药物无明显疗效,可以作出鸡传染性支气管炎的初步诊断,但要确诊还必须分离到IBV和进行鉴定。以下程序经实践证明是较实用的。采集气管、肺、肾等病料制成悬液,经抗菌药物处理后接种9~10日龄鸡胚尿囊腔,隔48h将胚置于4℃冷死,收获尿囊液。选择NDV凝集反应阴性的尿囊液肓传3~5代,待出现典型的侏儒胚变化并进行鸡胚内干扰NDV试验。这种试验较简单:将可疑为IBV的尿囊液接种9~10日龄鸡胚,10h后再接种NDVB1弱毒,又过了36h(共46h)便收集尿囊液检测其对鸡红细胞的凝集作用(HA)并与只接种NDV—B1株的尿囊液的HA滴价比较。如果前者HA滴价<20,而后者>40,则可认为有干扰作用,分离物差不多可以确定为IBV(辛朝安,1982)。有时原始病料混进NDV,此时可用NDV抗血清进行感作处理再接种鸡胚以达到提纯IBV的目的(艾国光等,1980、1982)。获得分离物后应作病的人工复制。通过喉头开口向11~28日龄幼鸡气管内注射0.2ml含毒胚液,一般24~48h内就会出现典型的呼吸器官症状。有人跟踪通过鼻滴入的带颜色的液体发现是经吞咽动作入消化道,因而认为滴鼻感染的鸡其气管刮取物中的病毒是感染后繁殖的病毒而非起初滴入的病毒,故滴鼻感染再从气管回收病毒是较合理的程序。
        进一步的IBV鉴定,除了抗脂溶剂、耐温、耐酸碱等理化检验以及核酸型鉴定和电镜观察外,各种血清学方法较为常用。它们亦可用于疾病调查,其中值得提一提的有以下数种。
        1.中和试验  这是利用标准的阳性血清与被检病毒混和后接种鸡胚、鸡胚气管器官培养物或CEK细胞培养物等进行的。前两种宿主系统适用于刚分离的野毒,CEK系统却要求经多次传代在CEK能产生CPE的适应病毒株。中和试验特异性高,可以鉴定血清型,取材也比较容易,但取结果需几天时间。
        2.间接血凝试验  用已知IBV标准株致敏经戊二醛和鞣酸处理的兔红细胞,可以制备检测抗体的抗原。本试验有高度敏感性和特异性,可检出100%感染鸡,抗体效价可达512倍,感染后60天抗体价不见下降。可以与新城疫(ND)、马立克氏病(ND)、传染性喉气管炎(ILT)等多种鸡传染病的阳性血清进行鉴别。用被检病毒注射鸡制备抗血清进行间接血凝可以确定是否与红细胞上的IBV同一个血清型。本试验操作简单,出结果快。有两种操作法:白瓷板法用未经稀释的血清在20~25℃温度条件下,2min就可判定结果;微量板法对血清作二倍系列稀释,在室温2h可判定(王锡坤等,1984)。
        3.琼脂凝胶沉淀试验(AGPT)  这种通常简称琼扩的试验,用于IB多作检抗体用(冠玫霞等,1991)。当用于检抗原,须用鸡制备标准IB高免血清;被检抗原则是气管刮取物。感染后12h便呈阳性结果,以第3、4天比例高一些,可持续1周。本法特异性强,可与ILT、ND、FP区别(黄国模,1984)。有人用条件为电压4--6V、电流4~5mA、时间1.5h,在巴比妥缓冲液制备的琼脂板进行对流电泳,发现发病第2天无沉淀线而3周后才出现(胡仁山等,1984)。
        4.酶联免疫吸附试验(ELISA)  利用密度梯度离心法提纯IBV抗原包被微量板,依次加入被检鸡血清、兔抗鸡IgG酶标记物、底物、终止液等。有人发现ELISA比AGPT和血清中和试验(SN)检出的抗体高峰早得多,分别为感染后的第11、14、28天,持续期也较长,分别为98、56、56天。作者认为ELISA有较强的群特异性,不同毒株之间有交叉反应,而在HI试验和荧光抗体试验(FAT)中,不同血清型之间交叉不明显。
        鉴别诊断:有几种鸡的呼吸道疾病对生产影响很大,须要与IB加以区别。
        1.鸡新城疫传播速度稍比IB慢,体温升高43"12以上,死亡率一般也比较高,有的病鸡出现神经症状。
        2.传染性鼻炎传播迅速,面部肿胀和鼻、眼分泌物增多,小鸡较少发生。鼻分泌物抹片可见两极杆菌,抗菌药物有疗效。
        3.传染性喉气管炎小鸡较少发生,有出血性气管炎,久病鸡气管粘膜上形成干酪样假膜,气管上皮细胞切片可见核内包涵体。
        4.鸡慢性呼吸道病传播缓慢且病程长。病原为支原体,抗菌药物有疗效。
        5.禽曲霉菌病1~2日龄雏发病,再大一些少发或散发。发生在温暖潮湿季节。肺、气囊有粟粒大小灰白色或黄色结节。

     
    防治措施 
        (一)治疗
        对IBV没有特异疗法。由于实际生产条件下常并发细菌性疾病,故采用一些抗菌药物有时显得有疗效。有人用青霉素10万单位加链霉素10万单位加蒸馏水2ml肌注,重病鸡6h一次,连用2天,第3天改为每天2次,结果治疗后死亡大大减少,仅为治疗前的1/8。轻病鸡每天肌注2次连用2天,症状消失基本痊愈(李兴广,1985)。有人在多种抗生素对肾病变型IB进行治疗不奏效的情况下,改用在饮水里加0.5%碳酸氢钠3天,第4天药量减到2/3,第5天1/2,第6天到1/3,连用7天左右,死亡率从13%降到5%,有明显效果。作者认为,碳酸氢钠是通过肾脏排泄的,可中和并排出尿酸盐,减轻肾脏肿大和尿酸盐中毒(方正刚,1988)。也有用双花、连翘、板蓝根等中药制成煎剂拌入饲料治疗IB的报道(耿忠堂,1984)。
        (二)预防措施
        本病防制应考虑防止病原入侵鸡群,减少诱发因素和提高鸡只的免疫力。
    IBV对外界抵抗力不大,媒介物的传播作用也不重要,故一般的鸡场消毒、鸡舍合理间隔,对防治本病有效。最主要的是防止感染鸡只进入鸡群。应从没有IB疫情的鸡场购入鸡苗,采用“全进全出”和批间空置场舍的饲养制度。应记住表面康复的鸡也仍可在数周内继续排毒。
        受冷、鸡舍氨气过多、疫苗接种的应激作用、缺乏维生素A等均可诱发呼吸道疾病。饲料中蛋白质过多、给磺胺类药物可以增加肾脏的负担,对肾病变型IB有加剧作用。为此,应针对性地加强饲养管理。
        疫苗接种是目前预防IB的一项主要措施。鉴于被动免疫(如母源抗体)只能减轻疾病的症状,不能防止IBV感染呼吸道(齐新勇,1991),本病引起的损失又主要是幼鸡阶段的感染所致,故小鸡的免疫接种是重点。引进的荷兰H120、H52株与我国主要流行株, M株以及IB肾病变型毒株有交叉免疫,故成为国内使用最广的两个IB疫苗株。
        H120疫苗对14日龄雏鸡安全(10~20倍免疫量)有效,免疫后3周保护率达90%。 H52疫苗对14日龄的鸡引起较严重反应,不宜使用。但对90~120日龄的鸡却安全(吴志达等,1981、1982)。有人主张H120于10日龄、H52于30日龄接种为合理的免疫程序(李扬陇,1984)。H120和H52是经多次鸡胚传代而育成,在鸡胚内生长较快。用新鲜胚液接种后20h毒价最高,用冻干毒接种则24~28h达高峰。因此,收毒时间比强毒的要早得多。含疫苗毒的胚液加脱脂乳制成的冻干苗,稀释1 000倍给幼鸡饮水免疫可在接苗后6天产生较坚强免疫(王西川等,1982)。免疫方法有滴鼻、喷雾、饮水等,以饮水方法最简便,但IBV抵抗力低,给疫苗前应注意清理供水设备。
        各地也筛选过当地IBV株作疫苗使用。广东地区分离、筛选的一肾病变型毒株D41,经安全、效力、对生殖器官功能的影响、返强等试验,证明对防制广东地区流行的肾病变型IB效果很好(陈天杰等,1987)。
        为了节省时间、经费,近年来采用Np—IB二联苗免疫鸡群。根据在鸡胚IBV繁殖比ND快,H120或H52弱IB毒接胚后30h收活胚毒价最高,NDV—I系收毒最佳时机为接种后40h的死胚,NDV—Ⅱ系或Ⅳ(LaSota)收毒最佳时机为接种后96h的活胚的规律,李扬陇(1984)采用不同稀释度的搭配毒株同时注射同一鸡胚并同时收获ND—IB二联苗。结果发现两种病毒的滴价与分开生产、等量混合的二联苗差不多。因此,新的生产程序可以节省人力、物力。
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